细胞污染防治的一些建议

  无论新人还是熟手，细胞污染都是必须要面对的，那对于细胞污染，我觉得zui好的措施就是预防为主，因为细胞一旦污染，想救是非常困难的，即便救活，细胞状态也会差很多。所以我先来说下我是怎么预防细胞污染的。

      生物安全柜是处理细胞的主要场所，也是细胞发生污染的主要场所，所以安全柜的正确使用是预防细胞污染的di一步。那么安全柜内需要注意的小细节有哪些呢？

       首先，所有进入安全柜的东西在进入前都要用75%的酒精消毒。特别要注意的是我们的手，只要出了安全柜，再进入安全柜前都要喷75%的酒精消毒。实验耗材尽量放置在合适的容器内用报纸包好后灭菌，如*头插入*头盒，其他不规则的耗材可放入铝制饭盒内。*头插入*头盒时要带手套，因为灭菌可能无法去除*头上可能粘附的油脂或其他杂质。

       其次，安全柜内的东西要摆放有序，这个可以根据个人使用习惯而定（如果站友使用的是公用安全柜，则可能需要使用前临时调整），以我为例，移液器和*头盒（各种规格备齐）放右边，实验中需要使用的试剂放右前方，废液缸放左前方，并保证和试剂有一定安全距离，右角放置培养皿，左角放置其他耗材（如试管等），尽量保证常用的东西放右手边（左撇站友相反），次常用的东西放左手边（左撇站友相反），右边操作区域为洁净区，左边为非洁净区（如废液缸和其他用剩材料）。

       再次，由于使用安全柜的过程中手和前臂都是要进入安全柜的，所以有条件的站友应该准备至少一件细胞房连体洁净服（装入布袋消毒后烘干，在细胞房中取出，非更换前不得穿出细胞房），没有条件的站友则至少准备一副套袖，每次用完后放安全柜中紫外消毒。

       在准备工作一切就绪后，细胞的处理过程也是大家需要注意的。细胞处理前应将当次实验需要的各种试剂、耗材准备齐备，尽量减少细胞处理过程中的来回走动。安全柜使用前zui好紫外照射30min灭菌，然后通风5min保证换气到位。实验过程中，所有试剂zui好不用就盖上瓶盖，如果需要打开瓶盖，则除了干净的*头，其他任何东西都不要从瓶口的正上方经过，防止试剂污染。细胞培养若使用培养皿，则zui好不要长时间打开皿盖。另外移液器也是细胞污染的一个隐藏途径，特别是使用无滤芯*头的站友，在吸取试剂时，很容易不小心将试剂倒吸入移液器，如果发生这种情况，要及时用酒精棉球擦去倒吸的试剂，特别是培养基，极易成为细菌生长的温床。一把污染的移液器可以轻松污染站友的所有细胞，甚至整个实验室的细胞，所以友情推荐有条件的站友在处理细胞时一定要使用带滤芯的*头。当然即便是使用带滤芯的*头，也要尽量避免试剂倒吸，因为想要*去除倒吸入移液器的试剂非常困难。

       培养箱作为细胞培养的场所，也需要站友留心。由于培养箱内的温度和湿度很高，是很适宜细菌生长的，所以如果有条件（实验室有2个或以上培养箱），zui好定期用75%酒精擦拭培养箱，及时定期更换培养箱内水槽。

       那么细胞如果还是不幸污染了，那又该怎么办呢？我把细胞污染分为早期和晚期两种。早期污染是细胞状态变差，但依旧能保持生长，显微镜下（光镜）不可见明显微生物或可见少量微生物，这时候我们在换液时建议多用PBS洗几次，然后用双抗原液侵润细胞1-2min，吸去，再加入正常培养基。早期污染只要发现及时，处理得当，救回来的可能性还是很大的。晚期污染则是细胞形态发生明显改变，细胞停止生长，显微镜下可见明显微生物。这时候我建议大家及时清理掉相关细胞，以免污染其他细胞，重新复苏更早批次的细胞。所以大家会发现，新细胞收到后，不应急于开展实验，而应该先小心培养，冻存1到2个批次的早期细胞，然后再开展实验，这样实验细胞一旦出现问题，可以有库存细胞保证实验还能继续进行。